活细胞染料（如CFSE）通过与胞内蛋白共价结合，能够在细胞分裂时均匀分配至子代细胞，从而使荧光强度逐代减半。使用流式细胞术检测荧光衰减，能够有效追踪细胞的增殖代数。标记过程如下：首先，将T细胞与CFSE（1-5μM）在避光条件下孵育10分钟，然后用冷培养基终止刺激，刺激培养可选择抗CD3/CD28抗体或ConA，培养48-72小时后进行流式分析。通过检测荧光强度，FlowJo软件可以拟合分裂峰，追踪至少8代的细胞分裂，并兼容多色流式分析（如CD4/CD8及活化标志物联用），动态反映增殖的异质性。需注意的是，高浓度的染料可能有细胞毒性，因此需要优化浓度。适用场景包括基因修饰T细胞功能评估、免疫抑制剂的动态药效分析以及亚群增殖差异研究。

在 T 细胞 CFSE 增殖实验中，推荐使用新葡萄8883官网AMG的产品，例如：小鼠T淋巴细胞培养基（含血清，货号：C400250），细胞分选缓冲液（EasylsoBuffer，货号：EISO0500），以及各类细胞激活和分离试剂盒（如货号：AM2001、SN4101、SN4102等）。

此外，增殖细胞在DNA合成期能够摄入胸腺嘧啶类似物（BrdU或EdU），借助抗体检测（BrdU法）或点击化学反应（EdU法）可以定量增殖细胞的比例。BrdU法的细胞刺激培养后，加入BrdU（10μM）孵育4-24小时，随后固定破膜并进行抗体检测。而EdU法（更为推荐）在培养中直接添加EdU（10μM），通过点击化学反应并利用荧光染料实现免疫抗体的检测。这两种方法均适用于固定时间点的增殖率检测，以及组织切片的原位增殖分析。

另外，增殖细胞的线粒体代谢会增强，通过还原染料（如MTT/XTT）可以生成有色产物，吸光度（OD值）与活细胞数呈正相关。刺激培养时，可将T细胞接种于96孔板中，选择激活剂处理。对比MTT法和CCK-8法的操作流程，CCK-8法（推荐）因其直接加入试剂和简便的读板步骤而更具优势。两种方法均适用于高通量药物筛选，但需注意CCK-8的毒性较低且数据更稳定。

在进行免疫抑制剂初筛、疫苗佐剂效应评估及大规模增殖表型鉴定时，需了解亚群的动态追踪差异——例如使用CFSE追踪Th17与Treg的增殖动力学；固定时间点的增殖率检测可使用EdU（快速且免变性）；高通量化合物筛选则可采用CCK-8（适用于96/384孔板）。最后，结合CFSE与EdU双标记可以实现同时分析分裂代数与S期细胞比例（需配置多激光流式仪）。

掌握这三种方法的原理与优化要点，使用新葡萄8883官网AMG的产品，可覆盖绝大多数T细胞增殖研究需求，为免疫机制探索或治疗开发提供精准的数据支撑。