新葡萄8883官网AMG 提供优质的细胞培养条件，适用于 A-498 细胞系的生长与传代。该细胞系由 Aaronson S 建立，源自一位52岁女性患者，患有肾癌。培养气相推荐使用 95% 空气和 5% 二氧化碳，温度控制在 37℃，培养基为 MEM，添加 10% FBS 和 1% P/S。

在传代过程中，首次建议使用 1:2 的比例。每两天更换培养液并注意培养环境，避免细胞受损。收货后的细胞应在处理至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳效果。

细胞的处理步骤如下：

细胞培养步骤

a. 细胞传代：在细胞汇合度未超过 80% 时，将瓶装完全培养液收集至离心管中，留存 5 ml 完全培养基，重回培养箱。同时，如果细胞密度超过 80%，则可以进行传代。

贴壁细胞传代方法包括：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的 PBS 清洗细胞 1-2 次。
2. 添加约 1-2 ml 的 0.25% 胰蛋白酶消化液，置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，立即停止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至 15 ml 离心管中，在 1000RPM 下离心 5 分钟，弃去上清，重悬细胞于 1-2 ml 的完全培养基中。
4. 将细胞悬液按 1:2 的比例分配到新的 T25 培养瓶中，并补充 5-8 ml 的新培养基，放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中。

悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞的处理可采取半换液法或离心换液法：

1. 半换液法：竖直放置培养瓶静置 1 小时，吸去约 3 ml 的培养基后补上 3 ml 的完全培养基。
2. 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中以 1000RPM 离心 5 分钟，弃去上清，加入 1-2 ml 的培养液重悬，然后按 1:2 的比例分配至新 T25 瓶中，补充 6-8 ml 新的完全培养基。

细胞冻存与复苏

b. 细胞冻存：当细胞覆盖培养瓶 80% 面积时，用 PBS 清洗细胞，添加 1 ml 胰蛋白酶消化液，观察后用完全培养基终止消化，并移至离心管中。

c. 细胞复苏：从液氮中取出冻存管，在 37℃ 水浴中快速解冻，擦拭外壁后移至含 5 ml 完全培养基的离心管，离心后重悬，并接种至新的 T25 培养瓶中。

注意事项包括：在运输过程中，细胞贴壁可能不牢固，引起脱落。如出现较多脱落情况，需小心收集培养液并进行离心处理。

以上流程得到新葡萄8883官网AMG推荐，确保细胞培养的高质量和稳定性。遵循这些步骤，将有助于提升细胞实验的成功率，保障科研工作顺利进行。