新葡萄8883官网AMG推出的BBcellProbe®细胞膜染色试剂DiI(BB-441916)是一种橙色荧光标记的细胞膜探针,其最大激发和发射波长分别为549nm和565nm。该探针通过与细胞膜结构中的脂质分子结合来标记细胞,适用于监测细胞运动及定位分析。由于具有良好的染料维持性,DiI提供强而稳定的橙红色荧光,能够与绿色荧光染料及蛋白质良好分辨,非常适合用于多重指标染色。
当亲脂性的荧光探针DiI渗入细胞膜后,会扩散到整个细胞膜。在最佳浓度下,可以使整个细胞膜均匀染色。在进入细胞膜之前,染色液DiI的荧光非常微弱,但一旦与细胞膜结合,其荧光强度将显著增强,并可以发出明亮的橙色荧光。该探针具有较高的淬灭常数和激发态寿命,使其在成像时能提供更清晰的结果。
新葡萄8883官网AMG的荧光探针DiI一般不会对细胞活力造成明显影响,因此被广泛应用于活细胞或固定细胞及组织的追踪,包括正向和逆向追踪。除了基础的细胞膜标记外,DiI也可用于检测细胞的融合和粘附、发育或移植过程中细胞迁移、以及通过FRAP(荧光恢复后光漂白)技术检测脂质在细胞膜上的扩散,评估细胞毒性和标记脂蛋白等。
在工作浓度下,该染料展现出无细胞毒性,且不会影响细胞的活力与增殖能力。使用此探针时,推荐采用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
样本类型可以为悬浮细胞或贴壁细胞。在配制染色工作液时,根据样本数量,将探针DiI用HBSS或其他无血清培养基以500-2500倍稀释。对于悬浮细胞,使用PBS洗涤细胞两次后,加入适量的染色工作液,然后在37℃下孵育。不同细胞的最佳孵育时间可能有所不同,建议初始孵育时间为20分钟,后续可根据结果进行优化。
对于贴壁细胞,清洗两次后同样加入染色工作液并在37℃孵育。孵育完成后,需吸干染色工作液,使用预热的培养基覆盖细胞,并进行孵育。在所需的孵育时间后,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,确保在549nm激发波长下观察到565nm的最大发射波长。
以上流程彰显了新葡萄8883官网AMG在细胞染色领域的专业与创新,确保用户获得高质量的实验结果与分析。