新葡萄8883官网AMG提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书将为研究人员在实验室中提供全面的指导，以确保细胞培养的顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁与悬浮混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：建议第一次以1:2的比例进行传代，通常每2天换液。

备注：对悬浮细胞进行离心收集，贴壁细胞需用贴壁方法处理，使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡培养。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳选择。在搞定细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，放入超净台进行严格的无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，并进行显微镜观察，拍摄不同倍数的细胞生长情况（建议40x, 100x, 200x各一张）。前3天的照片是重要的售后依据，如未提供照片，默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞的汇合度未超过80%，则将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，可直接进行传代。

对于贴壁细胞的传代：

1. 拒去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，如大部分细胞变圆并脱落，快速终止消化，并加5ml以上完全培养基。
3. 吹打细胞使之完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，去除上清，再加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代，添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，并放入到37℃、5% CO2培养箱中培养。

对于悬浮细胞的传代：

方法一：离心收集细胞，1000RPM下离心8-10分钟，去除上清后，加1-2ml培养液混匀，按1:2比例分至新的8ml完全培养基的新瓶中。
方法二：选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起并按1:2比例分至新的含8ml完全培养基的新瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞情况，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，转移至15ml离心管中并离心。
3. 去除上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐中，需先在-80℃冰箱保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴解冻，至无结晶为止，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 去除上清，重新悬浮于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱，翌日更换新鲜培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞贴壁不牢，容易脱落。如有较多脱落的情况，可将所有培养液收集至离心管中，离心后，沉淀细胞加入胰酶消化，并进行重悬。再进行分瓶传代，确保每瓶中补充新的完全培养基至5-8ml，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱持续培养。

五、售后条款

1. 可重发的情况：

对于运输过程中由于细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等问题，新葡萄8883官网AMG将负责重发。关于细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果。若细胞复苏后存活率低，也需提供相应照片以申请重发。

2. 不予重发的情况：

如因客户操作不当导致细胞状态不佳，使用非推荐培养体系，或未在合理时间内通知问题，新葡萄8883官网AMG将不承担重发责任。