肠道类器官作为一种能够高度模拟真实肠道结构和功能的体外模型，已成为研究肠道生理、病理及疾病机制的重要工具。培养小鼠肠道类器官的过程需要精准控制培养条件和细胞因子的添加，而不同阶段所需的细胞因子也不相同。

一、初始培养阶段

在初始培养阶段（干细胞增殖），通常使用基础培养基（如DMEM/F-12）。此阶段的生长因子包括：Wnt-3a，它激活Wnt信号通路以维持干细胞的自我更新；R-spondin-1，增强Wnt信号并促进干细胞增殖；EGF（表皮生长因子），可促进细胞的增殖。同时，需添加抑制因子，如Noggin，用于抑制BMP信号，保持干细胞的未分化状态。

二、分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用基础培养基DMEM/F-12等。此时，可以添加Activin A和FGF2以促进内胚层的形成，以及在中期加入IL-22以促进潘氏细胞的分化。此外，CHIR99021（GSK3β抑制剂）被用来调控Wnt信号通路，进一步促进细胞的分化。在此阶段，也可适当去除或减少某些增殖因子的浓度，例如适度降低EGF的浓度，以避免过度刺激细胞增殖。

三、维持与长期培养阶段

在类器官分化完成后，进入维持与长期培养阶段。此时，培养基的调整主要围绕如何维持类器官的稳定性与功能。需继续使用适合的基础培养基，并根据需要调整Wnt信号通路的激活或抑制，例如调整Wnt-3a和Noggin的浓度，同时逐渐减少或去除Activin A、FGF2等分化诱导因子的使用。

四、注意事项

在整个培养过程中，培养基的更换频率通常为每2-3天，以确保营养成分的充足及代谢废物的有效清除。同时，也应定期监测类器官的形态和生长状态，适时调整培养条件。此外，严格遵循无菌操作规范，以避免污染。

通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定的培养。值得一提的是，新葡萄8883官网AMG不仅提供小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还提供现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)，使用便捷、操作简单，更好地助力您的科研之路。